一代测序仪即Sanger测序仪，在基因研究和临床检测领域应用广泛，尽管其测序速度相对较慢且成本较高，但在精度方面的卓越表现仍然得到了科研人员的青睐。本期为大家介绍一代测序仪，方便大家了解该型设备的基本情况、原理特点、技术优势及应用现状。

一、设备基本情况

一代测序仪为美国ABI-3500Dx型一代测序仪，主要由激光源、数据检测主机、DNA测序系统、DNA片段分析系统、数据分析软件包及控制系统组成。该型测序仪采用8通道3500Dx毛细管系统、505 nm单波长固态长寿激光源、6种不同荧光染料标记和无线电频率识别（RFID）标签，可以实现平均30分钟完成一次电泳运行、40分钟内完成8个样品的序列检测、测序长度1000-1500 bp。

二、技术原理

该型测序仪的基本原理是Sanger测序法，即双脱氧末端终止法：将被荧光标记的ddNTP掺入到dNTP中，由于ddNTP随机掺入，PCR产物从引物之后的第一个碱基开始，每一个位置都有可能是ddNTP。由于ddNTP缺乏链延伸所需要的3'-OH，链的延伸就选择性地在G、A、T或C处终止。所以PCR产物不能和普通PCR一样，形成一条电泳带，而是一组长度相差一个碱基的成百上千个片段。这些片段具有共同的起始点，终止在不同的核苷酸上。将得到的不同大小的片段进行毛细管电泳，通过对荧光信号的采集和拼接，最终获得目的片段的序列。

三、技术优势

（1）可配套多种测序试剂盒，满足多样性检测需求

①配套通用型、长片段型、高GC型和一步法测序分析试剂；

②可配套基于16S核糖体RNA基因测序的MicroSEQ微生物鉴定系统；

③可配套人类HLA分型系统，包含A、B、DR分型试剂盒和相关分析软件；

④可配套基于测序技术的KRAS、BRAF、EGFR等肿瘤基因突变检测标准方法和相关软件。

（2）配置了多种分析软件，使结果分析更加便捷

①Variant ReporterTM软件：用于突变检测和分析，SNP探查和验证，以及序列确认；

②测序分析软件及KBTMBasecaller软件：用于测序数据的分析、显示、编辑和打印；

③SeqScapeTM软件：用于突变检测和基于样品库的等位基因鉴定；

④GeneMapper TM软件：用于基因分型、等位基因检出、片段分析和SNP分析。

四、技术应用

Sanger测序法是目前基因变异鉴定的“金标准”，该型基因测序仪因其可以提供可靠、高效的DNA序列分析技术，在生物医学研究中被广泛应用。

①De Novo测序；

②基因突变、SNPs、插入或缺失等克隆产物的重测序验证；

③病毒、细菌、真菌等微生物的分型鉴定，HLA分型；

④对二代测序、三代测序等产生的测序结果进行针对性验证；

⑤多种遗传疾病的基因分析（STR、MLPA、MI、LOH、SAGE、Methylation）、药物敏感基因分析、肿瘤基因突变分析、染色体非整倍体分析、亲缘鉴定分析等。

五、对外开放

实验室有专业老师负责该型测序仪的使用和维护，所有测序实验由负责老师进行操作，如有使用需求，请与实验室联系。

联系人：郭老师

咨询电话：010-66928551

文字：郭丙乾 梅竹松

供稿科室：临床医学实验室

主管 | 空军特色医学中心政治工作部

主办 | 融媒体中心

期号 | 1153期

总 编：江海洋

主 编：赵建强

责 编：周志婧

美 编：张洪涛

校 对：魏育鸽